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了解动物疫病血凝分析仪的原理

发布时间: 2017-09-22  点击次数: 1374次

动物疫病血凝分析仪型号:DY-7000

DY-7000动物疫病血凝分析仪广泛于动物疫病预防控制中心、动物防疫监督所、兽医药品监察所、兽医研究所、大学、疫苗生产和大中型饲养企业等单位。 
DY-7000动物疫病血凝分析仪是国内*根据国标中重大疫病免疫监测方法研制的设备,配套使用自动血凝分析管理软件,能自动监测常见重大动物疫病的免疫抗体效价,及时掌握动物疫病流行规律和疫情动态,建立动物免疫效果监测记录档案。系统当前监测项目有:猪瘟抗体正向间接血凝检测、口蹄疫抗体正向间接血凝检测、高致病性禽流感H5亚型抗体血凝抑制检测、高致病性禽流感H7亚型抗体血凝抑制检测、高致病性禽流感H9亚型抗体血凝抑制检测、新城疫抗体血凝抑制检测。 

试验方法: 
1 血凝(HA)试验 
1) 在V型微量反应板的1~12孔均孔加入0.025ml PBS,换滴头。 
2) 吸取0.025ml血凝抗原加入*孔,混匀。 
3) 从第1孔吸取0.025ml血凝抗原加入第2孔,混匀后吸取0.025ml加入第3孔,如此进行对倍稀释至第11孔,从第11孔吸取0.025ml弃去,换滴头。 
4) 每孔再加0.025ml PBS。 
5) 每孔均加入0.025ml 1%(V/V)鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入)。 
6) 将反应板在振荡器上震荡1~2分钟或轻扣反应板混合反应物,在室温(20~25℃)下静置40分钟后观察结果,(如果环境温度太高,可置4℃环境下),在对照孔红细胞显著呈钮扣状时判定结果。 
7) 结果判定  将板倾斜,观察红细胞有无呈泪滴状流淌。*血凝(不流淌)的抗原或病毒zui高稀释倍数代表一个血凝单位(HAU)。 
2  血凝抑制(HI)试验 
1) 根据HA试验测定的效价,计算配制4个血凝单位(4HAU)抗原。以*血凝的病毒zui高稀释倍数作为终点,终点稀释倍数除以4即为含4HAU抗原的稀释倍数。例如,HA效价为1:256,则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。 
2) 加稀释液: 
在微量反应板的第1~11孔加入0.025ml PBS,第12孔加入0.05ml PBS。 
3) 稀释待检血清: 
取1号待检血清0.025ml加入*排第1孔,充分混匀后吸0.025ml于第2孔,依次对倍稀释至第10孔,从第10孔吸取0.025ml弃去。 
取2号待检血清加入第2排;取3号待检血清加入第3排……均按上法稀释。 
  注意!每取一份血清时,必须更换吸头。 
4) 稀释阴性血清: 
  在血凝板的第7排*孔加阴性血清0.025ml,对倍稀释至第3孔,混匀后从该孔取出0.025ml弃去。 
    5) 稀释阳性血清: 
  在血凝板的第8排第1孔加阳性血清0.025ml,对倍稀释至第10孔,混匀后从该孔取出0.025ml弃去。 
6) 第1~11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025ml,在室温(20~25℃)下静置30分钟或2~8℃ 50分钟。 
7) 每孔加入0.025ml 1%(V/V)的鸡红细胞悬液,震荡混匀,在室温(20~25℃)下静置20~30分钟或2~8℃ 45~60分钟,对照红细胞将呈明显钮扣状沉于孔底。 
结果判定  
以*抑制4 HAU抗原的zui高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。 
只有阴性对照孔血清滴度不大于2log2,阳性对照血清误差不过1个滴度,试验结果才有效。 
禽流感灭活疫苗的免疫效果判定:家禽免疫后21天进行免疫效果监测。禽流感抗体血凝抑制(HI)抗体效价≥24判定为合格 
存栏家禽抗体合格率达到≥70%判定为合格。 
新城疫免疫效果监测:免疫21天后,进行免疫效果监测。抗体血凝抑制试验抗体效价≥25判定为合格 
存栏家禽抗体合格率达到≥70%判定为合格。 

【注意事项】  
(1)HA和HI试验影响因素甚多,应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头,同时应严格控制作用温度和时间。 
(2)准确配制红细胞悬液,使用时应随时振摇。 
(3)用pH值7.0~7.2的PBS作为稀释液。 
(4)抗原和阴、阳性血清若有污染,应废弃。 
(5)准确配制4HAU抗原,使用前需进行滴定,滴定好的抗原应在2小时内用完。 
(6)抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2~8℃保存不过1个月;可分装成小包装,-70℃冻存,随用随取。切忌反复冻融。 
(7)鸭、鹅以及哺乳动物的血清一般需进行非特异性凝集和抑制素的处理。 
(8)同一亚型不同毒株的HI试验抗原,若抗原性存在差异,则检测同一血清的HI效价不同。 
(9)在使用微量加样器时,枪头进入试剂瓶面下约2~3ml深处,不可过深。待枪头撤出液面后斜贴在试剂瓶的瓶壁上,淌走多余的液体,防止形成液滴滴入凝集板孔中。 
(10)鸡红细胞悬液是现配现用,剩余的放于4℃保存,如果出现溶血现象则不能使用。 
(11)每次检测可只做一份阴阳性血清对照试验。 
(12)试验完成后立即上机判读,否则易出现红细胞下滑现象。 
(13)冻干对照血清和抗原存放于-20℃,溶解过后存放于4℃。

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